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平衡色谱柱还有区分

A.含盐流动相

非盐流动相:对于非盐流动相,可以直接使用并用实验要求方法平衡色谱柱30min以上便可进样采集。

含盐流动相:使用到含盐流动相时,不能直接拿来使用。

 

因为含盐流动相和高比例有机相接触时盐会析出结晶,所以需要先用过渡流动相(除了不含盐,配置方法同含盐流动相)冲洗系统及色谱柱,然后再换用含盐流动相来冲洗系统并平衡色谱柱。

 【注】含盐流动相冲洗详细过程,请参考开机冲洗系统中含盐流动相冲洗系统步骤操作。


 

B.梯度方法 

等度方法:流动相比例不会随着时间的变化而变化,在整个实验过程中恒定不变。所以针对等度实验只需要在第一针进样之前平衡好色谱柱就可以了。

梯度方法:流动相比例会随着时间的变化而改变。所以梯度方法在结束后会再加上平衡色谱柱的时间。这样才能保证多次进样的重复性。

 

以人参梯度方法为例:

流速:1.0mL/min;

流动相:A:水     B:乙腈

时间

(分钟)

流动相A

(%)

流动相B

%

0-35

81

19

35-55

81→71

19→29

55-70

71

29

70-100

71→60

29→40

100-105

81

19

105-120

81

19

 

如上,此实验的梯度方法到100min的时候已经结束,但是不能马上进样下一针,因为色谱柱还需要平衡到初始状态; 所以100-105min代表用5min的时间将水和乙腈比例变回到初始状态81:19,105-120min代表维持水和乙腈81:19比例,平衡色谱柱15min(此时间越久平衡色谱柱效果越好)。


 

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